ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)，留意事項(xiàng)如下：
正式實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制實(shí)驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，闡明有非特異性反響，可選用羊血清、兔血清或BSA等關(guān)閉。
在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的挑選是很重要的
實(shí)驗(yàn)其中包括：
1）固相載體的挑選：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行挑選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反響，調(diào)查其顯色反響是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
2）包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多選用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它實(shí)驗(yàn)條件相同時(shí)，調(diào)查陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。挑選OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。
仔細(xì)閱讀闡明書(shū)
1.確認(rèn)試劑盒在有效期內(nèi)
2.按闡明書(shū)確認(rèn)一切試劑*（數(shù)量、體積）
3.標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，留意低溫保存
4.準(zhǔn)備好一切實(shí)驗(yàn)額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等
5.依據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確認(rèn)所需試劑的量
6.按闡明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，制造所需試劑
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