生物素親和素ELISA系統(tǒng)介紹

生物素親和素(又稱抗生物素)系統(tǒng)(biotin avidin system,BAS)標(biāo)記抗體的技術(shù)是20世紀(jì)70年代后期發(fā)展起來的一種新的免疫檢測方法。由于親和素與生物素間的親和力強(qiáng)，結(jié)合迅速，且極其穩(wěn)定，生物素標(biāo)記抗體和酶的標(biāo)記率高，又不影響蛋白的活性，使BAS標(biāo)記技術(shù)比常規(guī)酶聯(lián)免疫、放射免疫及熒光免疫技術(shù)有著更高的靈敏度，為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的途徑。近年來，在BAS檢測中多用鏈霉親和素“streptavidin,SA"，它是鏈霉菌培養(yǎng)過程中的分泌物，完整的鏈霉親和素和從卵白中提取的親和素一樣，也由4條相同的肽鏈組成。因鏈霉親和素在檢測應(yīng)用中發(fā)生的非特異性結(jié)合遠(yuǎn)較親和素低，因此日漸受重視，已有取代親和素之勢。

各種抗體或酶的標(biāo)記物在國內(nèi)已有商品供應(yīng)，使用方便。BAS ELISA具有的特點(diǎn)：

①對于所有的抗原抗體系統(tǒng)，包括免疫細(xì)胞化學(xué)、ELISA、免疫印跡法等都適用，應(yīng)用范圍極廣；

②BAS在溫和條件下可與各類生物大分子如蛋白質(zhì)、脂多糖等結(jié)合，并且這種結(jié)合對原生物大分子的生物活性無影響；

③每個(gè)親和素分子可與4個(gè)生物素分子結(jié)合，所以可以偶合更多連接生物素的酶分子，從而大大提高了靈敏度；

④生物素和親和素間親和力強(qiáng)，故二者一旦結(jié)合，就極為穩(wěn)定，不受在ELISA方法中的保溫及多次洗滌影響，而且這種結(jié)合反應(yīng)時(shí)間比抗原抗體反應(yīng)所需時(shí)間短；

⑤結(jié)果專一性強(qiáng)，非特異性顯色或染色背景極低；

⑥抗體稀釋度高，可節(jié)約抗體。

原理

生物素或親和素與抗體分子或標(biāo)記物結(jié)合后，既不影響前者的親和力，也不改變后者的特性。親和素分子的4個(gè)活性部位并非都和連接在抗體分子上的生物素殘基結(jié)合，剩下的游離部位尚可作為另一種生物素標(biāo)記蛋白質(zhì)的受體。這些特點(diǎn)就是BAS免疫標(biāo)記技術(shù)的基礎(chǔ)和原理。

BAS基本檢測方法可分為兩大類，一類以游離親和素居中，分別連接生物素化大分子反應(yīng)體系和標(biāo)記生物素，稱為BAB法或橋聯(lián)親和素生物素法(bridged avidin biotintechnique,BRAB)，其改良法稱為(avidin biotin complex,ABC)法。另一類以標(biāo)記親和素連接生物素化大分子反應(yīng)體系，稱為BA法或標(biāo)記親和素和生物素法(LAB)。

現(xiàn)分別介紹如下：

1.BA法亦稱LBA法。系將特異性抗體生物素化，將酶分子標(biāo)記在親和素分子上，生物素化抗體與被檢抗原結(jié)合后，再借BAS的高度親和力將酶分子聯(lián)結(jié)到抗原分子上，經(jīng)酶促反應(yīng)即可檢出抗原。

2.BAB法亦稱BRAB法。系將特異性抗體生物素化，將酶分子標(biāo)在生物素上，然后以游離親和素橋聯(lián)物，使被檢抗原、生物素化抗體和酶標(biāo)生物素聯(lián)成一體。

3.ABC法原理與BAB法基本相同，只是親和素和酶標(biāo)生物素需要先按一定比例形成ABC復(fù)合物，這種網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)結(jié)合了大量的酶分子，當(dāng)親和素尚未被酶標(biāo)生物素飽和時(shí)，生物素化抗體即可與之結(jié)合。

以上便是BAS ELISA的三種基本檢測法。上述方法中，如將第二抗體生物素化，即為間接法。由于間接法增加了一級抗原抗體反應(yīng)，因而比直接法更敏感，應(yīng)用范圍更廣。近年來許多學(xué)者對上述基本方法進(jìn)行了改良，有人用親和素抗體或A蛋白作橋聯(lián)物。另外還發(fā)展了BA ELISA競爭法和抑制法等。