1．標本貯存時間過長 標本在2～8~C下保存時間過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA試劑盒測定中會導致本底過深、甚至造成假陽性。血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8~C下保存1周，如為有菌操作，則建議冷凍保存。樣本的長時間保存，應在一70~C以下。
2．標本溶血 要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA 測定中，如血清 標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
3．ELISA試劑盒冷凍保存標本避免反復凍融 冷凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。此外，標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的渾濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。
4．標本凝固不全 血液采集后，如收集管中無促凝劑和抗凝劑，則血液通常在半小時后開始凝固，18～24h*凝固。日常檢驗中，常在血液還未開始凝固時即離心分離血清，此時因血液沒有*凝固，離出的“血清”并非為*的血清，其中仍殘留部分纖維蛋白原，如將其加入微孔中，在ELISA測定過程中仍可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果。因此，血液標本采集后，應使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當?shù)拇倌齽?br />5．標本被細菌污染 樣本的采集及血清 分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體 等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的p—半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的ELISA試劑盒測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。