豬高鐵血紅蛋白ELISA試劑盒說明書　　
　　用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。
　　
　　保存：2-8℃
　　
　　主要用途：科研檢測ELISA試劑盒
　　
　　凡在本司購買試劑盒客戶，我司提供免費代測服務(wù)，一周內(nèi)出結(jié)果，保證質(zhì)量。
　　
　　1、避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
　　
　　2、實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
　　
　　3、不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
　　
　　樣本要求
　　
　　1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
　　
　　2、標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
　　
　　3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。
　　
　　豬高鐵血紅蛋白ELISA試劑盒說明書試驗時，注意事項如下：
　　
　　1.正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
　　
　　2.在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
　　
　?。?）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
　　
　?。?）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。
　　
　　（3）酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
　　
　?。?）酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入
　　
　　豬高鐵血紅蛋白ELISA試劑盒說明書性能
　　
　　1.靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
　　
　　2.特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。
　　
　　3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
　　
　　結(jié)果判斷與分析
　　
　　1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
　　
　　2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的IL-1標(biāo)準品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的IL-1含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準曲線換算出相應(yīng)的濃度。
　　
　　3、檢測值范圍：0-800pg/ml
　　
　　4、敏感度：1.0pg/ml