近期不少客戶(hù)向研域(上海)化學(xué)試劑業(yè)務(wù)員訴苦免疫組化中總呈現(xiàn)假陽(yáng)性，很是頭疼。今日小編我特意給您們找來(lái)了以往總結(jié)的經(jīng)歷，希望能協(xié)助更多的科研朋友！
1. 消除病理性色素的影響：
  當(dāng)所檢動(dòng)物因?yàn)槌鲅仍驑?gòu)成吞噬含鐵血黃素細(xì)胞增多時(shí)，為防止其與 DAB 顯色呈現(xiàn)的黃褐色發(fā)作混雜，優(yōu)先選用AEC顯色劑。安排固定時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)時(shí)，切片中簡(jiǎn)單發(fā)作福爾馬林色素顆粒，影響成果調(diào)查，選材時(shí)應(yīng)充分用流水沖刷，以消除影響。
  切片制作不當(dāng)引起的非特異性上色 在嚴(yán)峻變性、壞死及炎性病灶處，在膠原纖維和結(jié)締安排部位，在切片裱貼不平、折皺處以及安排邊際部位常會(huì)呈現(xiàn)非特異性上色。其間有的是因安排荷電狀況改動(dòng)而吸附抗體；有的機(jī)理不明；有的可能與安排邊際或皺折深部的槽形構(gòu)型有關(guān)，處理的辦法是在滴加一抗前，以二抗動(dòng)物的正常血清（ 5 %~10 %）關(guān)閉、飽滿(mǎn)電荷吸附位點(diǎn)和改善選材與制片技能。
2. 清洗不充分而構(gòu)成的非特異性上色：
  應(yīng)嚴(yán)厲操作規(guī)程。緩沖液中含一定量的鹽，其有利于減低布景上色，一般運(yùn)用 0.05mlo/L PBS ，溶液內(nèi)參加吐溫 20 ，效果更佳。特別符號(hào)時(shí)，試劑公司一般都供給緩沖液的配方。別的，在清洗后至參加下一步試劑前，不能干片，干片的部位會(huì)呈現(xiàn)非特異上色。
  DBA顯色發(fā)作的某些布景顏色 運(yùn)用濃縮型 DAB 試劑盒時(shí)，請(qǐng)嚴(yán)格依照說(shuō)明書(shū)標(biāo)明的滴加次序操作，留意校正蒸鎦水的 pH 值，以確保試驗(yàn)成果的正確性。粉劑 DBA 溶解時(shí)，常有一些不溶性顆粒，這些顆粒須經(jīng)過(guò)濾除去。不然可能堆積于切片安排上，發(fā)作斑駁狀上色。別的， DAB 保存不當(dāng)發(fā)作氧化物亦可堆積于切片上，因而需將 DAB 保存于避光枯燥處，現(xiàn)用現(xiàn)配，臨用前加 H2O2。
3. 消除內(nèi)源酶的影響：
  在觸及免疫過(guò)氧化酶的各種染色中，均用過(guò)氧化物酶來(lái)符號(hào)抗體，酶的效果是催化底物，使顯色劑顯色，正常安排中也含有一定量的過(guò)氧化物酶，其相同也能催化底物顯色，而影響免疫組化染色的特異性，因而在參加符號(hào)酶前應(yīng)設(shè)法將其滅活，以確保染色反響的特異性。
  一般狀況下，去除內(nèi)源酶的辦法是先用 3%的過(guò)氧化氫溶液效果，但在含有豐富血細(xì)胞的標(biāo)本中，因?yàn)檠?xì)胞中存在很多具有活性的過(guò)氧化物酶，能與過(guò)氧化氫發(fā)作激烈的反響，發(fā)作氣泡而破壞安排結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形狀。在 OCT 包埋的冰凍切片中，運(yùn)用 3%的過(guò)氧化氫化溶液亦會(huì)發(fā)作相似現(xiàn)象。此刻可用 3%的過(guò)氧化氫甲醇溶液孵育 20 分鐘的辦法滅活內(nèi)源性酶。
  滅活內(nèi)源酶對(duì)正確判別含血細(xì)胞較多的標(biāo)本，如骨髓、胎盤(pán)、脾等的染色成果十分重要。相同，正常細(xì)胞也含生物素，尤以肝、脾、腎安排含量為多。在使用親和素試劑的染色中，內(nèi)源性生物素易結(jié)合后繼抗體，構(gòu)成親和素（或鏈親合素） - 生物素復(fù)合物，導(dǎo)致假陽(yáng)性發(fā)作。消除這種非特異性上色的辦法，是在選用生物素辦法染色前，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行親和素處理，使其結(jié)合位點(diǎn)飽滿(mǎn)。
4. 消除非特異性布景上色：
  非特異性上色zui常見(jiàn)的狀況是蛋白質(zhì)（抗體）吸附到安排切片中高度荷電的膠原及結(jié)締安排成分上，防止非特異性布景上色的辦法之一是在滴加一抗前在標(biāo)本上加一種無(wú)關(guān)的蛋白質(zhì)溶液，關(guān)閉荷電點(diǎn)不給一抗留有吸附余地，以確保一抗不會(huì)吸附到膠原纖維及結(jié)締安排成分上。zui常用的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液是所用二抗的同種動(dòng)物非免疫血清。用發(fā)作二抗的同種動(dòng)物血清，是為了防止二抗與預(yù)先參加的蛋白質(zhì)結(jié)合引起假陽(yáng)性染色。
  用來(lái)阻斷非特異性結(jié)合的血清不能有任何溶血現(xiàn)象。紅細(xì)胞破裂會(huì)使其間的過(guò)氧化酶與底物效果，發(fā)作非抗原特異性的陽(yáng)性上色。多克隆抗體因其成分雜亂，更易構(gòu)成布景染色。稀釋液選用含 1%BAS pH7.4 的 PBS ，一起在洗液中參加 0.05%的吐溫 20 （ Tween20 ）有助于消除布景染色。